液相色譜儀流動相溶劑使用的注意事項
2021-03-22 10:49:21來源：admin
液相色譜儀流動相為溶劑,既有運載作用,又和固定相一樣,參與對組分的競爭,因此溶劑的選擇對分離十分重要。 一個理想的液相色譜流動相溶劑應(yīng)具有低粘度、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。 所以液相色譜儀流動相溶劑使用的應(yīng)注意以下事項。
2.流動相恢復(fù)到室溫后使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復(fù)到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務(wù)必注意。
3.做HPLC流動相的試劑應(yīng)用HPLC級的、水應(yīng)用二次蒸餾水，水相流動相需經(jīng)常更換，防止長菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。
4.流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的
5.用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用后都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過夜或更長時間。
6.若需要使用含鹽的流動相，使用前請務(wù)必過濾。并且使用該含鹽流動相前，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。
7.進(jìn)行梯度實驗時要注意梯度變化過程中流動相的互溶性，避免因流動相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動相后在接柱子。
8.在更換兩種互不相溶的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然后在用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。
9.儀器在短期（兩三天）不用時，流路中可以是甲醇或水。儀器在長期不用時，流路中應(yīng)用甲醇。
10.對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動相溶劑，如甲醇、乙腈等。
11.當(dāng)流動相溶劑為乙腈時，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低。可適當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。
12.流動相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會對流路中的PEEK樹脂管路強度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。
13.用于檢定梯度等性能時，短時間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。
14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會引起爆炸。
