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色譜那些事:液相色譜氨基柱的使用(第三期)

2019-02-09 20:52:36來(lái)源:admin

    “色譜那些事 ” 回顧:硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)色譜柱的保存,色譜柱對(duì)液相色譜系統(tǒng)的要求

本期內(nèi)容:液相色譜氨基柱的使用

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        氨基柱簡(jiǎn)介

  氨基柱,全稱氨丙基鍵合硅膠色譜柱,色譜柱家族中最靈活的色譜柱,不僅可以用于正反相還可以應(yīng)用于離子交換(弱陰離子交換柱)中。

  氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)更容易水解,特別是當(dāng)你的使用條件是反相條件下時(shí),要特別注意控制pH值范圍,pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn);

  流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)(建議水比例不超過(guò)40%)。

  提示:在使用后以及準(zhǔn)備長(zhǎng)時(shí)間放置該柱時(shí),必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中是很好的保養(yǎng)措施。

  氨基柱的活化

  對(duì)于新氨基柱,首先應(yīng)詳細(xì)閱讀使用說(shuō)明書(shū),了解柱子出廠保存溶劑。一般出廠會(huì)保存在正相溶劑中,如果保存溶劑與你將要使用的流動(dòng)相極性不同不互溶,請(qǐng)先用異丙醇過(guò)渡。過(guò)渡過(guò)程中應(yīng)注意異丙醇粘度較大,會(huì)導(dǎo)致柱壓很高,應(yīng)使用小流速過(guò)渡。

  當(dāng)使用反相模式時(shí),用前請(qǐng)使用異丙醇小流速過(guò)夜平衡色譜柱。流速建議0.1-0.2mL/min,之后再轉(zhuǎn)換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉(zhuǎn)換到和流動(dòng)相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。

  當(dāng)使用正相模式時(shí),如與出廠保存溶劑互溶,可使用流動(dòng)相直接沖洗20倍柱體積;如不互溶請(qǐng)用異丙醇過(guò)渡。

  氨基柱的沖洗及保存

  簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),正相條件下使用的氨基柱參照硅膠柱的清洗方法;反相條件下使用的氨基柱參照C18的清洗方法。

  正相使用時(shí),將柱子沖洗干凈后,用正己烷-乙腈(99:1)保存(即出廠模式)。

  反相使用時(shí),如短期不用,可用甲醇或乙腈保存;長(zhǎng)期不用時(shí)需用異丙醇置換然后保存在正相模式下(即出廠模式)。


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