維生素是人體重要的營養(yǎng)物質(zhì)，但有些維生素在人體內(nèi)無法合成，或合成量不能滿足機體需要，要從外界攝取以滿足人體需要。維生素根據(jù)溶解度的不同，分為水溶性和脂溶性兩類，水溶性維生素主要有維生素C、B1、B2、B3、B5、B6、B11和B12。不同水溶性維生素的結(jié)構(gòu)差異較大，化學性質(zhì)不穩(wěn)定，分離檢測較為復雜困難。

       目前水溶性維生素的測定方法主要有分光光度法、分子熒光法和高效液相色譜法等。分光光度法的樣品前處理較復雜，且干擾物多，測定結(jié)果偏高。分子熒光法的樣品前處理也復雜，定量不精確。高效液相色譜法的樣品前處理簡單，用量少，可一次分析多種水溶性維生素，是目前最合適的測定方法。

實驗部分

      采用離子對試劑（四丁銨）作為流動相，由于離子對試劑易吸附在色譜柱上不易徹底清除，因此建議用來分析水溶性維生素的色譜柱專用。

圖1. 9種水溶性維生素標準品的色譜圖（上）和等高線圖（下）

1. 維生素 B1 (硫胺素) *    2. 維生素 B6 (吡哆素) *  3. 煙酰胺  

4. 維生素 B12 (氰鈷胺素)   5. 抗壞血酸糖苷  6. 維生素 C (抗壞血酸)  

7. 異抗壞血酸   8. 維生素 B2 (核黃素)   9. 菸堿酸

       使用二極管陣列檢測器（簡稱：DAD），除了色譜圖外，還可獲得光譜圖，兩者結(jié)合可排除僅通過色譜保留時間定性造成的假陽性峰，能對食品和其他含有大量雜質(zhì)的樣品進行精確有效的分析。

                                                        圖2. 維生素B6的標準曲線

      9種水溶性維生素的標準曲線(濃度范圍0.1 ~ 50 mg/L)均顯示了良好的線性， r² 均≥ 0.996。但采用流動相進行稀釋時，維生素C、異抗壞血酸和維生素B₁₂ 不穩(wěn)定，為獲得良好的線性，需使用新配制的溶液進行測定。

                                                 圖3. 保健飲料的測定結(jié)果

            圖4. 營養(yǎng)補充劑的測定結(jié)果

       該方法可同時檢測多種水溶性維生素，標準曲線線性良好。借助二極管陣列檢測器，可對食品和其他含有大量雜質(zhì)的樣品進行精確有效的分析，排除假陽性性峰的干擾。由于維生素C和異抗壞血酸不穩(wěn)定，在樣品制備過程中或隨著時間的推移，二者容易發(fā)生分解，因此難以獲得良好的線性和重現(xiàn)性。所以，此方法適用于定量分析，在定量分析時，建議對各維生素單獨測定。